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cDNA制备

       从某一特定组织细胞中获得的总RNA作为模板利用反转录酶进行反转录成为cDNA。
 
技术方法:
利用polyT(24),随机引物N9或基因特异性引物和M-MLV反转录酶进行cDNA的合成,一次反应RNA用量为1ug, 反应体系为20μl。反转录引物的选择根据具体实验要求而定,通常情况下采用polyT+N9, 对于只研究有限基因的项目,可采用基因特异性引物。利用cDNA特异的POLR2A扩增引物对反转录产物进行扩增质检。有特殊要求请来电咨询。


应用领域: 涉及分子生物学和基因组学表达水平分析及基因功能研究的以RNA为分析对象的实验研究领域。
 
样本要求:
不同组织细胞来源的总RNA, 要求有清晰的电泳图片。
 
服务内容:
  1. 获得以客户提供的总RNA为模板的cDNA。
  2. 取1μl 10倍稀释的反转录产物,用GAPDH引物扩增检验质量。
检测实例
琼脂糖凝胶电泳检测 针对cDNA利用POLR2A引物扩增的产物。
     M   1     2     3    4    5    6     7    8     9    10   M         
 
  
Marker为DL500,1-10号为10个逆转录样本,POLR2A扩增片段大小为126bp。
 
 
 
 
依所用引物不同有以下几种转录方式
随机引物N9

 
 
 
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